什么是免疫分析？它们有什么用处？
免疫分析是采用抗原-抗体化学性能及其相互作用来检测和定量研究分析物的分析方法，如细胞因子、趋化因子、生长因子和其它蛋白质。放射免疫分析法（RIA）和酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一些最常用的免疫分析方法。由于具有显著的灵敏度、特异性和精密度，酶联免疫吸附测定已成为免疫分析的金标准。酶联免疫斑点试验（ELISPOT）是另一种分析特异性抗体分泌细胞的强大免免疫分析方法。最近，基于捕获磁珠的免疫分析提供了测量多种分析物的敏感方案，并提供了比其它分析方法更大规模的多重化能力。
BD生物科学公司提供了定量分析细胞因子和趋化因子的多种工具和分析平台。
- 用于多路检测和分析的BD®CBA溶液
- 用于常规酶联免疫吸附测定研究应用的BD OptEIA™试剂盒和套件
- 用于测定细胞因子产生频率的BD®ELISPOT测定方法
细胞因子定量的工具和技术
| 工具/技术 | BD细胞计数法 | ELISA法 | ELISPOT |
|---|---|---|---|
| 检出的分子 | 分泌或细胞内 | 分泌的 | 分泌（原位） |
| 多参数 | 是 | 否 | 否 |
| 单细胞/细胞亚群信息 | 否 | 否 | 频率 |
| 抗原特异性 | 是 | 是 | 是 |
| 试验后活力 | 是 | 是 | 否 |
| 蛋白质定量 | 是 | 是 | 否 |
| 仪器 | 流式细胞仪 | 分光光度计 | ELISPOT酶标仪 |
磁珠免疫分析
磁珠分析方法采用荧光条形码磁珠代替与荧光抗体结合的培养板，并使用流式细胞术方法进行研究。与普通酶联免疫吸附测定分析相比，磁珠免疫分析能够实现高出几倍的目标多重检测，可以节省时间和样品。
BD®流式细胞仪珠阵列（CBA）的介绍
CBA检测方法为磁珠免疫分析方法，其使用荧光抗体检测多种可溶性和细胞内蛋白质，包括细胞因子、趋化因子、生长因子和磷酸化信号蛋白。
阵列中的每个捕获磁珠都具有独特的荧光强度，并涂覆了针对单个分析物的捕获抗体。将不同磁珠的组合与样品或标准品以及结合到报道分子（PE）上的检测抗体的混合物混合在一起。在培养和后续洗涤之后，在流式细胞仪上获取样品。
BD®CBA溶液能够添加任何重要蛋白质或抗体，以便增加灵活性。
BD® CBA功能磁珠可用于结合重要抗体或蛋白质，以满足特殊要求。结合程序采用磺基SMCC化学方法，使用普通实验室用品以及BD®CBA功能磁珠结合缓冲试剂盒中的缓冲液，所需时间不到4小时。这是将现有酶联免疫吸附测定转换为磁珠免疫分析的理想平台，可与我们的BD®CBA 弹性套件分析方法混合使用。可以使用多个磁珠位置，使得能够创建新颖的多元流式方案，而在单个反应中能够准备多达1000个测试，总确保了许多试验的一致性。
BD®CBA溶液可用于预配置试剂盒或开放、可配置格式，以满足独特需求。
代表性标准曲线（IL-12p70和TNF）
代表性标准曲线（IL-10和IL-6）
代表性标准曲线（IL-1和IL-8）
BD® CBA 弹性套件
BD CBA 30-Plex检测
经刺激的人PBMC
磷酸化ERK1/2蛋白检测
BD CBA功能微珠试验示例
BD®CBA增强灵敏度试剂盒
BD® CBA Flex套件与BD CBA增强型灵敏度Flex套件的比较。
BD® CBA Flex套件与BD® CBA增强灵敏度Flex套件2的比较
ELISA免疫分析
ELISA免疫分析或酶免疫分析（EIA）采用特异性抗原抗体结合和酶反应来检测和测量各种免疫细胞产生的蛋白质、肽和信号分子。在该方法中，采用特殊酶联免疫吸附测定微孔板来固定靶抗原或抗体或两者。随后，与高亲和力抗体一起培养，最终产生可检测信号，然后，可以采用比色法或酶促法进行测量。
根据采用的检测策略，可以使用若干种酶联免疫吸附测定形式。最常见类型是三明治式免疫分析形式，该方法采用附着在酶联免疫吸附测定微孔板上的捕获抗体来结合重要抗原。然后，采用第二一抗来结合该抗原。 因此，将该抗原夹在捕获抗体与一抗之间。随后，采用专用于一抗的生物素化二抗来进行信号放大和检测。
BD生物科学公司提供了三明治式酶联免疫吸附测定试剂盒和套件，以便于对血清、血浆和组织培养上清液中的可溶性蛋白质进行定量分析。
ELISPOT 免疫分析
ELISPOT分析常用于分析抗原特异性T细胞以及监测T细胞功能。这是一种强大的分析方法，用于检测和分析体外分泌特定蛋白质的个别细胞。虽然最初开发用于分析特异性抗体分泌细胞，但该检测法还用于测量产生和分泌多种其他效应分子（如细胞因子）的细胞频率。ELISPOT是一种高定量分析方法。
与三明治式酶联免疫吸附测定一样，ELISPOT采用微孔板，并将其附着到捕获抗体上。采用微孔板进行细胞培养，然后，刺激这些细胞分泌细胞因子。通过表面上的抗体，捕获所分泌的蛋白质。然后，采用适当的二抗放大和检测信号。
BD生物科学公司提供了若干种ELISPOT分析形式。BD®ELISPOT分析法可以检测单细胞水平上的细胞因子释放量，从而确定产生细胞因子的细胞频率。已发现BD®ELISPOT分析法比酶联免疫吸附测定法和细胞内染色法更敏感
仅供研究使用，不用于诊疗程序。
