多色流式细胞术原理
流式细胞术在逐个细胞的基础上分析细胞群，这是当今研究人员和临床医生寻找样本中许多细胞中的极少数细胞（如大海捞针）的关键能力，这将使他们能够研究疾病状态或生物学过程。其次，流式细胞术非常快速。常规样品分析速率可达每秒10000个细胞—相对于目视检查和计数细胞的历史方法，这是一个令人难以置信的进步。最后，流式细胞仪具有同时测量单细胞多个参数（多路）的能力。多路使得研究人员和临床医生能够比以往任何时候都更快地从单个样本中收集更多的信息。这些能力使流式细胞术成为一种强大的工具，对研究人员和临床医生都有多种应用。
流式细胞术如何工作
流式细胞仪包含三个主要系统—射流、光学和电子学。
射流系统将细胞样本（例如，人血液样本）漏斗到单一流中，使细胞一次通过一个激光束。当每个细胞通过光束时，它会散射光并可能发出荧光。这些光信号由光学系统收集并传输至各种检测器。然后通过电子系统将检测器接收到的信号转换为数值。结果可以显示在屏幕上，也可以使用专门设计的软件保存以备将来分析。
当每个细胞通过光束时，测量并记录其参数（特征）以及通过光束的时间。通常，每个样本至少收集10000个细胞的数据。
分选
首先设置参数，使流式细胞仪能够识别目标细胞。含有样品的液流通过射流系统在高压下漏斗化进入单个液流中，使细胞依次通过激光束，在激光束中检测细胞信息。如果细胞与规定的参数相匹配，则细胞分析仪会对其施加电荷。这导致带电细胞偏向收集管。然后研究人员可以取目标细胞在培养物中生长或在其他试验中研究它们。未带电荷的液滴继续流入废液容器中。该过程快速，可以每秒以高达20000个细胞的速度进行。
为您的实验找到最合适的细胞分选仪。BD Biosciences为各种研究应用提供了一系列的研究细胞分选仪，从简单的、台式的系统到先进的、完全可配置的系统。
测量细胞特性
当细胞通过激光束时，光向不同方向散射。测量光散射的程度和方向有助于研究人员确定细胞的大小和内部复杂性。利用流式细胞仪，一次可以研究多个细胞群，可以获得超出规模和复杂性的信息。
荧光作为细胞和细胞活性的标记物
单克隆抗体通常与荧光染料（荧光色素）连接，当被激光激发时，该染料将发出荧光。使用荧光染料可追踪与抗体或标记物结合的细胞。大多数细胞不会自然发出荧光。然而，如果荧光染料标记的单克隆抗体与细胞上存在的抗原结合，当细胞通过流式细胞仪的激光束时，将出现荧光信号。
荧光染料发出的光颜色彼此不同。例如，FITC（BD提供的一种荧光染料）将发出绿光，而PE（BD提供的另一种荧光染料）暴露于我们流式细胞仪中使用的激光时，将发出橙色光。使用不同的荧光染料有助于研究人员区分细胞群或不同的细胞活动。
荧光染料发出的光颜色彼此不同。例如，FITC（BD提供的一种荧光染料）将发出绿光，而PE（BD提供的另一种荧光染料）暴露于我们流式细胞仪中使用的激光时，将发出橙色光。使用不同的荧光染料有助于研究人员区分细胞群或不同的细胞活动。
Fluorescence as a marker of cells and cellular activities
| 荧光染料 | Em-最大值(nm) |
|---|---|
| BD Horizon™ BUV395 | 395 |
| BD Horizon™ BV421 | 423 |
| BD Horizon™ V450 | 450 |
| BD Pharmingen™ Pacific Blue™ | 455 |
| BD Horizon™ BV480 | 479 |
| BD Horizon™ BUV496 | 496 |
| BD Horizon™ V500 | 499 |
| BD Horizon™ BV510 | 512 |
| BD Horizon™ BB515 | 515 |
| Alexa Fluor™ 488 | 517 |
| BD Pharmingen™ FITC | 518 |
| BD Horizon™ BUV563 | 564 |
| BD Horizon™ BV570 | 573 |
| BD Pharmingen™ PE | 576 |
| BD Horizon™ BYG584-P | 583 |
| BD Horizon™ BV605 | 605 |
| BD Horizon™ BB630-P2 | 614 |
| BD Horizon™ BUV615 | 615 |
| BD Horizon™ PE-CF594 | 615 |
| BD Horizon™ BV650 | 649 |
| BD Horizon™ BUV661 | 660 |
| 荧光染料 | Em-最大值(nm) |
|---|---|
| BD Horizon™ BB660-P2 | 660 |
| BD Pharmingen™ APC | 660 |
| BD Pharmingen™ Alexa Fluor™ 647 | 669 |
| BD Pharmingen™ PE-C5 | 670 |
| BD Pharmingen™ PerCP | 675 |
| BD Pharmingen™ PerCP-Cy5.5 | 676 |
| BD Horizon™ BB700 | 695 |
| BD Horizon™ APC-R700 | 706 |
| BD Horizon™ BV711 | 713 |
| BD Horizon™ Red 718 | 718 |
| BD Pharmingen™ Alexa Fluor™ 700 | 719 |
| BD Horizon™ BUV737 | 735 |
| BD Horizon™ BV750 | 754 |
| BD Horizon™ BB755-P | 755 |
| BD Pharmingen™ APC-Cy7 | 779 |
| BD Pharmingen™ PE-C7 | 781 |
| BD Pharmingen™ APC-H7 | 782 |
| BD Horizon™ BV786 | 786 |
| BD Horizon™ BV790-P | 790 |
| BD Horizon™ BUV805 | 803 |
BUV, BD Horizon Brilliant™ UV; BV, BD Horizon Brilliant Violet™; BB, BD Horizon Brilliant™ Blue; BYG, BD Horizon Brilliant™ Yellow-Green; -P, prototype dyes.
多色流式细胞术
不同类型的细胞具有不同的抗原组合，并将与不同的抗体组合结合。如果用于检测细胞样品的每种单克隆抗体与不同的荧光染料连接，则可以借助细胞通过激光束时发出的颜色组合来区分细胞类型。
同时使用多种荧光染料的组合进一步增强了区分不同细胞群的能力。下图显示了一个示例，其中使用两种不同的单克隆抗体（每个抗体与不同的荧光染料连接）检测细胞样本以寻找T淋巴细胞。4种不同类型的细胞明显。
流式细胞术结合了荧光技术的灵活性和敏感性以及高速和数据整合能力。它已成为细胞分析的金标准，现在正被用作生命科学众多部门的分析工具。
胞内流式细胞术
胞内流式细胞术是鉴定细胞类型和分析细胞系和异质性细胞样本内信号传导和功能反应的有力技术。BD Biosciences提供多种试剂、试剂盒和方案，以促进细胞内流式细胞术。寻找支持细胞内细胞因子染色、磷蛋白和转录因子检测（通过细胞内流式细胞术）的工具和技术，包括BD荧光微球偶联抗体、缓冲液、试剂盒和方案。
了解更多信息
用于多色流式细胞术的BD Biosciences工具
流式细胞仪
作为流式细胞术的先驱，我们一直处于流式细胞仪仪器发展的前沿。我们提供全面的研究用细胞分析仪和细胞分选仪，以支持您完成整个研究过程
激光和染料
激光提供关于细胞大小和复杂性的信息，并激发与抗原特异性抗体结合的荧光染料，从而能够识别和理解细胞的功能。为了充分利用多色流式细胞术的能力，关键是要了解使用哪种荧光染料，比较不同荧光染料的光谱特性并根据需要分析的参数数量确定正确的仪器。我们为多色流式细胞术提供了跨越每条激光线的各种荧光染料。为了帮助您为实验选择合适的荧光染料，我们开发了荧光染料图谱，使您能够查看和比较具有激发/发射光谱、滤光片建议和相对分辨率信息等属性的染料。
BD OptiBuild™ On-Demand试剂
BD OptiBuild™ On-Demand试剂使您能够轻松获得不断增长的染料组合目录中所需的抗体。BD OptiBuild™试剂提供了评价和添加新荧光染料的灵活性，并简化了实验配色方案设计。
方案和资源
方案
为了帮助您找到合适的实验方案，我们开发了一个方案存储库。您可以在此处找到逐步指南、有用的建议和其他资源，以支持您的流式细胞术工作流程。
多色实验配色方案设计资源和工具
找到有用的工具和资源来支持多色实验配色方案设计、工作流程和实验分析。
