免疫组化检验

Overview

免疫组化检验（IHC）是一种强有力的工具，其利用特异性抗体的能力来检测组织样品中的重要抗原。免疫组化检验广泛应用于肿瘤组织的病理评价、预测肿瘤预后、预测治疗反应、确认感染的存在以及用于众多研究应用领域。¹除了检测抗原的存在或缺失外，免疫组化检验还有助于测定抗原的分布和位置。

免疫组化检验的原理

首先确定重要组织，进行石蜡包埋或冷冻保存，然后切片。对保存的切片进行处理（石蜡包埋切片采用脱蜡法，冷冻切片采用加热法），以便进行抗原修复，然后，用抗原特异性抗体进行免疫染色。正如蛋白质印迹法或酶联免疫吸附测定法，免疫组化可以是直接的或间接的（仅使用一种抗体或者将一抗和二抗结合起来）。通常，采用酶【如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）】来完成检测。用显微镜观察样品。

免疫细胞化学、免疫组化和免疫荧光 - 有哪些区别？

免疫组化的原理与免疫细胞化学（ICC）相似，但免疫组化使用组织样品，而ICC使用细胞。

免疫细胞化学（ICC）和免疫组化（IHC）均采用免疫标记抗原进行分析，并采用免疫荧光法。有时，免疫细胞化学法和免疫荧光法可以互换使用。

免疫细胞化学法侧重于细胞水平的分析，而免疫组化允许对整个组织进行检查。这两种方法都使用免疫荧光进行检测。也可以采用酶促检测（例如，使用3,3’-二氨基联苯胺（DAB））。

参考

Duraiyan J, Govindarajan R, Kaliyappan K, Palanisamy M. Applications of immunohistochemistry. J Pharm Bioallied Sci. 2012;4(Suppl 2):S307-S309. doi: 10.4103/0975-7406.100281

免疫组化检验样品的制备

免疫组化样品的制备

一旦获得了组织样品，最重要的是对其进行保存，使组织结构尽可能完整，使抗原尽可能接近采集时的状态。制备方法的选择还会影响样品的长期储存和抗原检测的容易程度。

固定剂的选择取决于待检测抗原以及分析类型（例如，形态或表达）。

组织固定：

免疫组化检验中，通常使用4%多聚甲醛（PFA）来保存组织样品。虽然该固定方法可以很好地保存组织结构，但是其会引起构象变化，从而可能影响抗原表位的正确检测。由于甲醛诱导的表位掩蔽，抗原修复剂通常用于增加获得抗原的可能性。

作为甲醛的替代品，可将锌等温和固定剂用于石蜡包埋切片。除甲醛和锌外，乙醇或丙酮也可用于固定免疫组化样品。

组织包埋

固定组织样品后，对组织样品进行石蜡包埋，以便能够进行组织切片。通常，采用石蜡来制备用于切片的试样块。另一种组织制备方法是快速冷冻样品。虽然冷冻是一种快速方法，并且可以保存抗原表位，但是冷冻过程中形成的冰晶会改变组织结构。

组织切片

组织切片可以生成切片，这些切片可作为免疫组化实验的染色基质。石蜡包埋组织需要切片机进行切片，而冷冻组织则使用低温恒温器进行切片。

BD Pharmingen™ 免疫组化锌固定剂是一种温和固定剂，能保持抗原和组织的完整形态，特别适用于白细胞标志物的检测，并能保持甲醛固定组织的相同结构。将BD Pharmingen™免疫组化锌固定剂与BD Pharmingen™ Retrievagen A（pH 6.0）和Retrievagen B（pH 9.5）溶液结合起来，可进一步增强某些表位的抗体反应性。