Cytokine 치료와 같은 multiple자극은 세포 증식에 영향을 미칠 수 있습니다. 세포 증식은 cytokine 노출과 같은 자극 또는 다양한 프로세스에 대한 반응으로 발생할 수 있습니다
Cell proliferation dyes
BD Biosciences는 violet laser와 blue laser를 각각 사용하여 세포증식을 측정하기 위한 BD Horizon™ Violet Proliferation Dye 450 (VPD450) and BD Horizon™ CFSE 를 제공하며, 이는 더 많은 panel의 사용을 촉진시킵니다. Multicolor 유세포 분석을 이용하여 제한된 샘플에서 더 많은 데이터를 결정할 수 있습니다.
이 proliferation dye는 모두 nonfluorescent esterified dye입니다. ester group 은 dye 가 세포안으로 침투할 수 있도록 합니다. Dye 가 세포 내부로 침투하면 esterase가 ester group을 절단해서 dye를 fluorescent product 로 변환시키고 세포 내부에 가두어 둡니다. 각 replication event에서 세포 내 dye가 감소하여 특징적인 패턴이 나타납니다.
BD Horizon™ Cell Proliferation Dye가 세포 내부에 자유롭게 들어갑니다. Dye는 일단 세포 내부에 들어가면 nonspecific esterases에 의해 절단되고 형광분자를 방출하여 세포 내부에 갇히게 됩니다.
AntiCD3e 및 anti-CD28로 자극된 mouse의 spleen(비장)에 대한 VPD450 및 세포주기 동역학의 농도. C57 Black/6 splenocytes을 다양한 농도의 BD Horizon ™ VPD450, DMSO로 load하거나 untreated control로 방치한 다음 2 일 동안 anti-CD3e 및 anti-CD28로 자극했습니다. Cell harvesting 전 BrdU로 pulsing한 다음 APC anti-BrdU 및 7-AAD (Cat. No. 552598)로 염색했습니다. 상단 panel (A–C)은 APC 항BrdU 및 7-AAD 염색을 나타낸 것입니다. 하단 panel (D–F)은 해당 VPD450 histogram을 보여줍니다. Controls cell (Cells–) (Panel A)과 1μM VPD450 loaded cell population (Panel C)에서는 BrdU + cell이 유사한 비율(각각 40.7 % 및 39.8 %)로 나타났습니다. Dye의 농도가 더 높은 경우 cell proliferation에 부정적인 영향을 미칠 수 있습니다(데이터는 표시되지 않음). DMSO (VPD450의 용매로 사용됨)가 proliferation 감소의 원인이 아님을 확인하기 위해 DMSO group을 포함했습니다(Panel B). Cell group 및 1μM VPD450 – loaded cell population 과 비교하여 DMSO 처리된 cell은 유사한 BrdU 백분율을 보였습니다.
