イムノアッセイとは？その用途とは？
イムノアッセイは、抗原-抗体化学構造とその相互作用を利用して、分析物（サイトカイン、ケモカイン、増殖因子、その他のタンパク質など）の検出と定量を行う解析法です。最も多く用いられているイムノアッセイは、ラジオイムノアッセイ（RIA）や酵素結合免疫測定法（ELISA）などです。ELISAは、その優れた感度・特異性・精度により、イムノアッセイのゴールドスタンダードとされてきました。このほか、酵素結合免疫スポット（ELISPOT）アッセイも、特定の抗体分泌細胞を解析するための強力なイムノアッセイです。より最近では、キャプチャービーズベースのイムノアッセイが、さまざまな分析物を測定できる高感度の手法として選択肢に加わりました。キャプチャービーズベースのイムノアッセイは、他のフォーマットよりも大きな規模でマルチプレックスを行うことができます。
BD Biosciencesは、サイトカインやケモカインを定量するためのさまざまなツールおよびアッセイのプラットフォームを取り揃えています
- マルチプレックスな検出や解析のためのBD® CBAソリューション
- ルーチンにELISAを用いる研究分野のためのBD OptEIA™キットおよびセット
- サイトカイン産生頻度を特定するためのBD® ELISPOTアッセイ
Tools and Techniques for Cytokine Quantitation
| Tool/Technology | BD® Cytometric Bead Array (CBA) | ELISA | ELISPOT |
|---|---|---|---|
| Molecules detected | Secreted or intracellular | Secreted | Secreted (in situ) |
| Multiparameter | Yes | No | No |
| Single-cell / cell-subset information | No | No | Frequencies, no subset information |
| Antigen-specific | Yes | Yes | Yes |
| Post-assay viability | Yes | Yes | No |
| Protein quantitation | Yes | Yes | No |
| Instrumentation | Flow cytometer | Spectro-photometer | ELISPOT reader |
ビーズベースのイムノアッセイ
ビーズベースのイムノアッセイでは、プレートの代わりに蛍光バーコード付きビーズを用いて蛍光抗体に結合し、フローサイトメトリー法を用いて調べます。ビーズベースのイムノアッセイでは、通常のELISAフォーマットを用いた場合よりも数倍高く標的をマルチプレックスに検出することができ、時間とサンプルを節約することができます。
BD®サイトメトリービーズアレイ（CBA）概論
CBAアッセイは、蛍光抗体を用いてさまざまな可溶性タンパク質や細胞内タンパク質（サイトカイン、ケモカイン、増殖因子、リン酸化シグナル伝達タンパク質など）を検出するビーズベースのイムノアッセイです。
アレイ内の1個1個のキャプチャービーズが固有の蛍光強度を持ち、単一の分析物に特異的な1個のキャプチャー抗体でコーティングされています。さまざまな組合せのビーズを、サンプル／標準物質と、レポーター分子（PE）に結合した複数の検出抗体の混合物と組み合わせます。インキュベーション後に洗浄し、フローサイトメーターにかけてサンプルを取得します。
あらゆる目的タンパク質や目的の抗体を追加できるBD® CBAソリューションが柔軟性を高めます
BD® CBA機能ビーズは、独自の要件を満たすため、目的の抗体やタンパク質を結合させるのに使用することができます。結合手順にはスルホ-SMCC化学構造を利用します。所要時間は4時間未満で、使用するのは、一般的なラボ用品と、BD® CBA機能ビーズ結合緩衝液キットに入っている緩衝液です。これは、既存のELISAを、当社のBD® CBAフレックスセットアッセイ製品ラインと組み合わせることのできるビーズベースのイムノアッセイに変換するための理想的なプラットフォームです。複数のビーズ配置が可能であるため、新規のマルチプレックスパネルを作製することができ、1回の反応で最大1,000回分の試験を行えるため、試験間の一貫性を確保することができます。
各種のBD® CBAソリューションを、設定済みキットにて、あるいは特殊なニーズに対応するオープンで設定可能なフォーマットにてご用意しています。
