マルチカラーフローサイトメトリーは、ヘテロな細胞集団からターゲットの細胞集団の迅速な多次元でに解析を提供します。そのアプリケーションには、免疫学、免疫腫瘍学、ウイルス学、免疫モニタリングなどが含まれます。BD Biosciencesは、パネル設計の柔軟性と結合抗体の包括的なポートフォリオを提供するために、すべてのレーザーラインにわたって革新的な色素を開発し、表面、細胞内、または分泌マーカーの詳細な特性評価を支援しています。単純な研究アプリケーションから複雑な研究アプリケーション向けのフローサイトメーターやソーターから、試薬の幅広い選択、学習のためのコンテンツ 、 ツール 、 プロトコール ,プロトコルの包括的なコレクションまで、マルチカラーフローサイトメトリーワークフローの旅を効率的にナビゲートするお手伝いをします。
マルチカラーフローサイトメトリーの原理
フローサイトメトリーは、細胞ごとに細胞集団を分析します。これは、病状または生物学的プロセスを研究するため、サンプル内の多くの細胞の中からごく少数の細胞を探している今日の研究者や臨床医にとって重要な機能です(like finding needles in a haystack)。第二に、フローサイトメトリーは非常に高速です。日常的なサンプル分析速度は、1秒あたり最大10,000細胞を解析できます。これは、細胞を視覚的に検査およびカウントする従来の方法を超える驚くべき進歩です。最後に、フローサイトメトリーには、単一細胞の複数のパラメーター（多重化）を同時に測定する機能があります。マルチプレックスにより、研究者や臨床医は、これまでになく迅速に単一のサンプルからより多くの情報を収集できます。これらの機能により、フローサイトメトリーは、研究者や臨床医向けの複数のアプリケーションを備えた強力なツールになっています。
フローサイトメーターは、どのようにして細胞を解析しているか？
フローサイトメーターには、流体工学、光学、電子機器の3つの主要なシステムが含まれています。流体工学システムは、細胞のサンプル（例えば、ヒトの血液のサンプル）を単一の流れに注ぎ込み、細胞が一度に１つずつレーザービームを通過するようにする。各セルがビームを通過すると、光を散乱させ、蛍光を発する場合があります。これらの光信号は光学システムによって収集され、さまざまな検出器に送られます。検出器が受信した信号は、電子システムによって数値に変換されます。結果は画面に表示したり、特別に設計されたソフトウェアを使用して将来の分析のために保存したりできます。各セルがビームを通過すると、そのパラメータ（特性）が測定され、ビームを通過した時間とともに記録されます。通常、データはサンプルごとに少なくとも10,000細胞の情報を保存します。
ソーティング
まず最初に、フローサイトメーターが目的の細胞を識別できるようにパラメーターを設定します。サンプルを含む流体の流れは、流体工学システムによって高圧で単一の流れに注ぎ込まれ、細胞がレーザービームを一度に1つずつ通過し、そこで細胞に関する情報が検出されます。細胞が指定されたパラメータに一致する場合、サイトメーターはそれに電荷をかけます。これにより、帯電したセルが収集チューブに向かって偏向します。その後、研究者は目的の細胞を取り出して培養で増殖させたり、他のアッセイで研究したりすることができます。帯電していない液滴は、ストリーム内で廃棄されます。このプロセスは迅速で、毎秒最大20,000セルの速度で実行できます。
実験に最適なセルソーターを見つけてください。BD Biosciencesは、シンプルなベンチトップシステムから高度で完全に構成可能なシステムまで、さまざまな研究アプリケーション向けのさまざまな研究用のセルソーター を提供しています。
細胞の検出、解析方法
細胞がレーザービームを通過すると、光はさまざまな方向に散乱します。光がどの程度、どの方向に散乱するかを測定することは、細胞のサイズと内部の複雑さの両方を判断するのに役立ちます。フローサイトメトリーを使用すると、一度に複数の細胞集団を研究でき、サイズや複雑さを超えた情報を取得できます。
細胞がもつマーカーを特定するための蛍光色素の検出
モノクローナル抗体は、レーザーで励起されると蛍光を発する蛍光色素（蛍光色素）に結合していることがよくあります。蛍光色素により、抗体またはマーカーに結合した細胞を追跡できます。ほとんどの細胞は自然に蛍光灯を発しません。ただし、蛍光色素タグ付きモノクローナル抗体が細胞に存在する抗原に結合している場合、その細胞がフローサイトメーターのレーザービームを通過するときに蛍光シグナルが検出されます。
蛍光色素は、放出する光の色が互いに異なります。たとえば、BDが提供する蛍光色素の1つであるFITCは緑色の光を発しますが、BDが提供する別の蛍光色素の1つであるPEは、フローサイトメーターで使用されるレーザーにさらされるとオレンジ色の光を発します。異なる蛍光色素の使用は、研究者が細胞集団または異なる細胞活動を区別するのに役立ちます。
Fluorescence as a marker of cells and cellular activities
| Fluorochrome | Em-Max (nm) |
|---|---|
| BD Horizon™ BUV395 | 395 |
| BD Horizon™ BV421 | 423 |
| BD Horizon™ V450 | 450 |
| BD Pharmingen™ Pacific Blue™ | 455 |
| BD Horizon™ BV480 | 479 |
| BD Horizon™ BUV496 | 496 |
| BD Horizon™ V500 | 499 |
| BD Horizon™ BV510 | 512 |
| BD Horizon™ BB515 | 515 |
| Alexa Fluor™ 488 | 517 |
| BD Pharmingen™ FITC | 518 |
| BD Horizon™ BUV563 | 564 |
| BD Horizon™ BV570 | 573 |
| BD Pharmingen™ PE | 576 |
| BD Horizon™ BYG584-P | 583 |
| BD Horizon™ RY586 | 586 |
| BD Horizon™ BV605 | 605 |
| BD Horizon™ BB630-P2 | 614 |
| BD Horizon™ BUV615 | 615 |
| BD Horizon™ PE-CF594 | 615 |
| BD Horizon™ BV650 | 649 |
| BD Horizon™ BUV661 | 660 |
| Fluorochrome | Em-Max (nm) |
|---|---|
| BD Horizon™ BB660-P2 | 660 |
| BD Pharmingen™ APC | 660 |
| BD Pharmingen™ Alexa Fluor™ 647 | 669 |
| BD Pharmingen™ PE-Cy5 | 670 |
| BD Pharmingen™ PerCP | 675 |
| BD Pharmingen™ PerCP-Cy5.5 | 676 |
| BD Horizon™ BB700 | 695 |
| BD Horizon™ APC-R700 | 706 |
| BD Horizon™ BV711 | 713 |
| BD Horizon™ Red 718 | 718 |
| BD Pharmingen™ Alexa Fluor™ 700 | 719 |
| BD Horizon™ BUV737 | 735 |
| BD Horizon™ BV750 | 754 |
| BD Horizon™ BB755-P | 755 |
| BD Horizon™ RB780 | 780 |
| BD Pharmingen™ APC-Cy7 | 779 |
| BD Pharmingen™ PE-Cy7 | 781 |
| BD Pharmingen™ APC-H7 | 782 |
| BD Horizon™ BV786 | 786 |
| BD Horizon™ BB790-P | 790 |
| BD Horizon™ BUV805 | 803 |
BUV, BD Horizon Brilliant™ UV; BV, BD Horizon Brilliant Violet™; BB, BD Horizon Brilliant™ Blue; BYG, BD Horizon Brilliant™ Yellow-Green; -P, prototype dyes.
マルチカラーフローサイトメトリー
さまざまな種類の細胞は、さまざまな抗原の組み合わせを持ち、さまざまな抗体の組み合わせと結合します。細胞のサンプルのテストに使用される各モノクローナル抗体が異なる蛍光色素にリンクされている場合、細胞の種類は、レーザービームを通過するときに放出される色の組み合わせによって互いに区別できます。
複数の蛍光色素の組み合わせを同時に使用すると、細胞の異なる集団を区別する能力がさらに向上します。次の図は、Tリンパ球を探すために細胞サンプルをテストする際に、それぞれが異なる蛍光色素にリンクされた2つの異なるモノクローナル抗体が使用された例を示しています。4つの異なるタイプの細胞が明らかでした。
フローサイトメトリーは、蛍光技術の柔軟性と迅速性を持ち合わせています。これは細胞分析のゴールドスタンダードになり、現在、ライフサイエンスの多くの分野で分析ツールとして使用されています。.
Intracellular flow cytometry
Intracellular flow cytometry is a powerful technique for the identification of cell types and the analysis of signaling and functional responses within cell lines and heterogeneous cell samples. BD Biosciences provides a variety of reagents, kits and protocols to facilitate intracellular flow cytometry. Find the tools and techniques, including BD fluorochrome-conjugated antibodies, buffers, kits and protocols that support intracellular cytokine staining, phosphoprotein and transcription factor detection by intracellular flow cytometry.
フローサイトメトリーにおける細胞内解析
細胞内フローサイトメトリーは、細胞の種類を特定し、細胞株および異種細胞サンプル内のシグナル伝達および機能的応答を分析するための強力な手法です。BD Biosciencesは、細胞内フローサイトメトリーを容易にするためのさまざまな試薬、キット、およびプロトコルを提供しています。細胞内サイトカイン染色、リンタンパク質、細胞内フローサイトメトリーによる転写因子検出をサポートするBD蛍光色素標識抗体、バッファー、キット、プロトコール などのツールとテクニックを見つけてください。
