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アポトーシスは、細胞の再生のために自己破壊するか、異常な細胞増殖を制御するように細胞に信号を送る組織化されたプロセスです。 細胞が損傷するか、不要になると、アポトーシスまたはプログラムされた細胞死が起こります。これは、胚発生および組織の恒常性の間に発生する通常の生理学的プロセスです。 アポトーシスは損傷した細胞の秩序ある死を制御しますが、壊死は組織の損傷の結果として発生し、損傷した細胞と周囲の細胞の両方の喪失を引き起こします
アポトーシスのメカニズム
アポトーシスのプロセスは、ある種の形態学的特徴を有します。それらは、細胞膜の変化(膜対称性の喪失、膜接着の喪失など)、細胞質と核の凝縮、タンパクの切断、およびDNAのヌクレオソーム間切断などを含みます。プロセスの最終段階で、死につつある細胞は「アポトーシス小体」へと断片化した状態になり、その結果周囲の細胞に有意な炎症性傷害を及ぼすことなく、食細胞によって除去されます。
しかし、ある種の細胞はアポトーシスに特有の特徴を示しません。この場合、細胞死のメカニズムを確認するには、アポトーシスの複数の側面を解析します。
この多様な研究をサポートするために、BD バイオサイエンスは、アポトーシスの各段階を解析するツールおよび技術を提供いたします。フローサイトメトリー、バイオイメージング、顕微鏡(生細胞および固定細胞の分析)から、ELISA、IHC、ウェスタンブロット 、蛍光分光分析に至るまで、多彩な方法を提供いたします。
細胞処理方法別、アポトーシスまたは細胞死の検出方法
細胞もしくは組織の違いによるアポトーシスの検出方法
Annexin V—アポトーシスシグナル伝達の主要タンパク
細胞膜の変化は、生細胞で検出されるアポトーシスプロセスの最初の特徴の1つです。通常は細胞膜の細胞質側に位置するフォスファチジルセリン(PS)の存在によって検出することが出来ます。アポトーシスの間、PSは細胞膜の外葉に移動し、カルシウム存在下、蛍光色素でラベルしたAnnexin Vに結合することにより、フローサイトメトリーや細胞イメージングによって検出することができます。
BD Biosciencesは、様々なレーザーに対応できるようにFITC, PE, BD Horizon™ BV421やBD Horizon™ BUV395がラベルされたannexin Vを提供しています。これらの新しく追加されたアネキシン試薬により、より実験の可能性が広がることを期待します。
細胞膜が損傷すると細胞内Annexin Vも露出されるので、死細胞を除外するため、アポトーシスを起こした細胞と既に死んでいる細胞を区別する、7-AAD等の細胞膜不透過性染色剤が一般的に用いられます。Annexin Vで染まった細胞集団は、アポトーシスを起こした細胞集団を表しています。
Annexin V -V450によるアポトーシス、壊死、および細胞死のモニター
Annexin V -BD Horizon V450によって、低用量のセツキシマブターゲット化金ナノパーティクルで処理した膵がん細胞株のラジオ波(RF)照射量依存のアポトーシス、壊死、および細胞死をモニターした。RF域出力が増すにつれて、温度が上昇し、アポトーシス(右下部)から明らかな壊死(左上部)へのシフトが認められる。